Details

Работа направлена на создание системы доставки мРНК в эукариотические клетки на основе внеклеточных везикул (экзосом) с целью облегчения целенаправленной генной и клеточной терапии. Для оптимизации эффективности трансфекции пДНК, кодирующей зеленый флуоресцентный белок (eGFP), в клетки A549 были определены соотношения пДНК и катионных липосом методом гель-ретардации. С помощью анализа агарозного геля было установлено соотношение пДНК и ее носителя 6/1. Морфологические характеристики комплексов, а именно размер и поверхностный заряд, были определены с использованием метода динамического рассеяния света. Подтверждение загрузки эндогенной мРНК, кодирующей eGFP, в экзосомы после трансфекции пДНК, оценка влияния модификации последовательности пДНК на эффективность загрузки эндогенной мРНК были проведены методом ПЦР в реальном времени. По результатам исследования, было показано что уровень эндогенной мРНК во внеклеточных везикулах после трансфекции клеток А549 модифицированной не увеличивается в сравнении с контрольной модельной пДНК.

The work focuses on developing an mRNA delivery system for eukaryotic cells based on extracellular vesicles (exosomes) to facilitate targeted gene and cell therapy. To optimize the transfection efficiency of plasmid DNA (pDNA) encoding enhanced green fluorescent protein (eGFP) into A549 cells, the ratios of pDNA to cationic liposomes were determined using a gel retardation assay. In the wake of the agarose gel analysis an optimal pDNA-to-carrier ratio of 6:1 was established. The morphological characteristics of the complexes, including size and surface charge, were determined using dynamic light scattering (DLS). Confirmation of endogenous mRNA (encoding eGFP) loading into exosomes after pDNA transfection, as well as the assessment of the effect of pDNA sequence modification on endogenous mRNA loading efficiency, were performed using real-time PCR (qPCR). The results demonstrated that the level of endogenous mRNA in extracellular vesicles after transfection of A549 cells with modified pDNA did not increase compared to the control model pDNA.