Details

Данная работа посвящена идентификации натриевых каналов в клетках миелоидного лейкоза человека К562, а также изучению влияния сериновой протеазы альфа-химотрипсин на активность каналов и миграционный потенциал исследуемых клеток. В электрофизиологических экспериментах было показано, что сериновая протеаза ɑ-химотрипсин активировала натриевые каналы в клетках К562, которые по своим биофизическим характеристикам схожи с ENaC. Блокатор ENaC амилорид ингибировал активность каналов только в высоких концентрациях, эффект был сильнее выражен на более отрицательных потенциалах. Подавление экспрессии δ-субъединицы ENaC с помощью миРНК было подтверждено с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии и ПЦР в реальном времени и показало ключевую роль δ-ENaC в формировании каналов, активируемых α-химотрипсином или капсазепином, причем для активации каналов протеазой необходимо присутствие γ-субъединицы. Наши результаты свидетельствуют о том, что амилорид и α-химотрипсин, как регуляторы проницаемости натрия через ENaC, снижают миграционный потенциал клеток лейкоза К562. Можно заключить, что натриевые каналы ENaC можно рассматривать как перспективную мишень для разработки новых методов лечения лейкозов на основе протеаз.

This work is devoted to the identification of sodium channels in human myeloid leukaemia K562 cells and to the study of the effect of serine protease alpha-chymotrypsin on channel activity and migration potential of the studied cells. In electrophysiological experiments, the serine protease ɑ-chymotrypsin was shown to activate sodium channels in K562 cells, which are biophysically similar to ENaC. The ENaC blocker amiloride suppressed channel activity only at high concentrations; the effect was stronger at more negative potentials. Knockdown of δ-subunit of ENaC by siRNA was confirmed by immunofluorescence microscopy and real-time PCR and showed a key role for δ-ENaC in the formation of channels activated by α-chymotrypsin or capsazepine, with the presence of the γ-subunit being essential for protease activation of the channels. Our results suggest that amiloride and α-chymotrypsin, as regulators of sodium permeability through ENaC, reduce the migration potential of K562 leukaemia cells. We can conclude that ENaC sodium channels can be considered as a promising target for the development of novel protease-based therapies for leukaemia.