Details

Работа посвящена изучению кластера генов Rol Т-ДНК из трансформирующей Ri-плазмиды из Agrobactrium rhizogenes штамма А4, способные к стабильной трансформации разных видов растений. Раскрытые функции Т-ДНК включают в себя биосинтез опинов зараженной растительной клеткой и повышение уровня фитогормонов, в частности цитокинов. Но другие функции этих генов, помогающих зараженному растению не просто выживать, но и вытеснять нетрансформированных сородичей остаются неизвестными. Более того такие вставки попадали в геном разных видов растений несколько раз на протяжение длительного эволюционного отрезка с сохранением своих функций и структуры. Трансформированные растения обладают высокой генетической стабильностью, а также способны in vitro к постоянному росту, неограниченному гормонами и высокому продуцированию вторичных метаболитов, что делает такой способ модификаций удобным инструментом в биотехнологии. В свою очередь Rol-кластер оказал большое влияние на эволюцию природно-трансгенных растений и оказался эволюционно устойчивой поликопийной генетической структурой. Изучение Т-ДНК и её влияние на молекулярные механизмы в клетках является перспективным направлением.

The work is devoted to the study of the Rol T-DNA gene cluster from the transforming Ri-plasmid from Agrobactrium rhizogenes strain A4, capable of stable transformation of different plant species. The disclosed functions of T-DNAs include the biosynthesis of opines by the infected plant cell and the enhancement of phytohormones, particularly cytokines. But other functions of these genes that help the infected plant not just survive but also outcompete untransformed congeners remain unknown. Moreover, such insertions have been inserted into the genome of different plant species several times over a long evolutionary period with preservation of their functions and structure. Transformed plants have high genetic stability and are also capable in vitro of continuous growth, unlimited hormones and high production of secondary metabolites, which makes this method of modifications a convenient tool in biotechnology. In turn, the Rol cluster has had a major impact on the evolution of naturally transgenic plants and has proven to be an evolutionarily stable polycopy genetic structure. The study of T-DNA and its influence on molecular mechanisms in cells is a promising direction.

• ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ
• ВВЕДЕНИЕ
• ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • 1.1. Горизонтальный перенос генов
  • 1.2. Мобильные генетические элементы (МГЭ)
  • 1.3. Разнообразие мобильных генетических элементов
    • 1.3.1. Перенос ДНК при помощи вирусов – трансдукция
    • 1.3.2. Транспозирующие элементы (ТЕ)
    • 1.3.3. Плазмиды
  • 1.4. Агробактерии
  • 1.5. Эволюционная история агробактерий и трансформированных растений
  • 1.6. Разбор фенотипических особенностей растений, трансформированных A. rhizogenes
  • 1.7. Особенности трансформации при помощи A. rhizogines
  • 1.8. Общая схема получения трансформированных тканей при помощи A. rhizogines
  • 1.9. Возможность агробактериальной трансформации клеток млекопитающих
  • 1.10. ТрансформирующиеTi/Ri-плазмиды
  • 1.11. Структура индуцирующих мегаплазмид
  • 1.12. Основные участки Ri-плазмиды
  • 1.13. Агробактериальная трансформация растительной клетки
• ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
  • 2.1. Real-time ПЦР
  • 2.2. Подбор праймеров и зонда для Real-time ПЦР.
  • 2.3. Выделение ДНК из растительной клетки
  • 2.4. Подготовка образцов ДНК для Real-Time ПРЦ
  • 2.5. Выделение РНК из растительной клетки
  • 2.6. Получение кДНК для анализа уровня экспресии генов
  • 2.7. Получение кДНК для анализа уровня экспресии генов
  • 2.8. Электрофорез
  • 2.9. Выращивание in vitro трансформированных растений Linaria Maroccana
  • 2.10. Приготовление питательной среды для выращивания растений
  • 2.11. Высадка побегов
• ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
• ЗАКЛЮЧЕНИЕ
• СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ