Details

Данная работа посвящена проработке и оптимизации протокола получения очищенного рекомбинантного белка MxA человека (ортолога Mx1), обладающего противовирусной активностью. Целью работы является получение нативной формы белка в системе экспрессии E. сoli, где MxA накапливается преимущественно в виде телец включения. Для достижения цели была проведена автоиндукция экспрессии, выделены тельца включения, проведены процедуры солюбилизации и рефолдинга с добавлением аргинина. Очистка осуществлялась с использованием методов иммобилизованной металл-аффинной и гель-фильтрационной хроматографий. Результативность подтверждена методами электрофоретического разделения в полиакриламидном геле и вестерн-блоттинга. Разработанный протокол позволяет получать очищенный рекомбинантный MxA, что делает его применимым в разработке диагностических тест-систем для дифференциации вирусной и бактериальной инфекций.

The given work is devoted to the development and optimization of a protocol for the production of purified recombinant human MxA protein (orthologue Mx1) with antiviral activity. The aim of the work is to obtain the native form of the protein in the E. coli expression system, where MxA accumulates mainly in the form of inclusion bodies. To achieve this goal, autoinduction of expression was performed, inclusion bodies were isolated, solubilization and refolding procedures with the addition of arginine were performed. Purification was carried out using the methods of immobilized metal-affinity and gel filtration chromatography. The effectiveness was confirmed by electrophoretic separation in polyacrylamide gel and Western blotting. The developed protocol makes it possible to obtain purified recombinant MxA, which makes it applicable in the development of diagnostic test systems for the differentiation of viral and bacterial infections.