Details

Задачи выпускной квалификационной работы: 1. Проанализировать научную литературу по теме работы. 2. Провести дизайн интересующего гена с его оптимизацией для дрожжевой экспрессионной системы и заказать его синтез в компании Genscript. 3. Наработать полученный экспрессионный вектор в клетках E.coli и очистить его. 4. Осуществить трансформацию клеток K. phaffii линеаризованным экспрессионным вектором и провести селекцию клонов-продуцентов. 5. Экспрессировать, очистить и конъюгировать с эфиром биотина целевые аллергены. 6. Провести иммунологические исследования применимости полученных аллергенов для диагностических целей. В настоящей работе c использованием системы экспрессии на основе Komagataella phaffii получены рекомбинантные аллергены rDer f2 и rDer p2. Синтезированы конъюгаты рекомбинантных аллергенов и эфира биотина. На основе иммунологического анализа конъюгатов делаются выводы об их потенциальной применимости в иммунодиагностике IgE-опосредованной гиперчувствительности к белкам домашних пылевых клещей. Работа выполнена на базе биохимической лаборатории ООО «Вега». При выполнении работы использовались базы данных eLIBRARY.RU, NCBI, Cochrane Library, UniProt, WHO/IUIS Allergen Nomenclature, руководство по использованию Pichia Expression kit, руководство пользователя pPICZα Pichia expression vectors, программное обеспечение «Vector NTI».

Objectives of the final qualifying work: 1. Analyze the scientific literature on the topic of the work; 2. Design the gene of interest with its optimization for the yeast expression system and order its synthesis from Genscript; 3. To develop the obtained expression vector in E. coli cells and refine it; 4. To transform K. phaffii cells with a linearized expression vector and select producing clones; 5. Express, purify, and conjugate target allergens with biotin ether; 6. To conduct immunological studies of the applicability of the obtained allergens for diagnostic purposes. In this work, recombinant allergens rDer f2 and rDer p2 were obtained using an expression system based on Komagataella phaffii. Conjugates of recombinant allergens and biotin ester have been synthesized. Based on the immunological analysis of conjugates, conclusions are drawn about their potential applicability in the immunodiagnostics of IgE-mediated hypersensitivity to proteins of domestic dust mites. The work was performed on the basis of the biochemical laboratory of Vega, LLC. The following databases were used in the work: eLIBRARY.RU, NCBI, Cochrane Library, UniProt, WHO/IUIS Allergen Nomenclature, Pichia Expression kit User Guide, pPICZα Pichia expression vectors user manual, Vector NTI software.