Details

Цель работы – подбор условий культивирования E. сoli для получения рекомбинантного капсидного белка DenC с максимальным выходом и долей в рас-творимой форме. Задачи исследования: Подбор условия культивирования, масштабирование в 5 – литровый биореактор, анализ экспрессии и растворимости белка. Объект – рекомбинантный штамм E. coli, продуцирующий химерный рекомбинантный белок. Предмет – влияние параметров культивирования на экспрессии и растворимости целевого белка. Работа выполнена в Лаборатории культивирования микроорганизмов Департамента разработки рекомбинантных препаратов СПбНИИВС. Выводы: Доказана перспектива использования капсидного белка в качестве основы вакцины для профилактики лихорадки. В колбах оптимальными условиями оказались: среда TB, индукция 2 мМ IPTG при 37 °C в течение 3 ч. Масштабирование в биореактор потребовало оптимизации: понижение концентрации IPTG до 0,2 мМ, внесение при оптической плотности от 8,00 до 10,00, индукция 4 ч с подпиткой, что повысило общий выход белка, несмотря на частичное образование телец включения. Использованы базы: КиберЛенинка, ЭБС Айбукс.ру, elib.spbstu.ru, eLIBRARY.RU, PudMed. Статистическая обработка: Microsoft Excel, MagicPlotPro, Image Lab.

The aim of this study was to select E. coli cultivation conditions to obtain the recombinant capsid protein DenC with maximum yield and proportion in soluble form. Study objectives: Selection of cultivation conditions, scaling up to a 5 – liter bioreactor, and analysis of protein expression and solubility. Subject: A recombinant E. coli strain producing a chimeric recombinant protein. Subject: The effect of cultivation parameters on the expression and solubility of the target protein. The study was performed in the Microorganism Cultivation Laboratory of the Recombinant Drug Development Department at the St. Petersburg Research Institute of Vaccines and Sanitary Sciences. Conclusions: The potential of using capsid protein as the basis for a vaccine for the prevention of fever was demonstrated. Optimal conditions in flasks were: TB medium, induction with 2 mM IPTG at 37°C for 3 hours. Scaling up to a bioreactor required optimization: decreasing the IPTG concentration to 0.2 mM, adding at an optical density of 8.00 to 10.00, and induction for 4 hours with fed – batch. This increased the overall protein yield despite the partial formation of inclusion bodies. Databases used: CyberLeninka, EBS Aibux.ru, elib.spbstu.ru, eLIBRARY.RU, PudMed. Statistical processing: Microsoft Excel, MagicPlotPro, Image Lab.