Details

Объект исследования – нервные структуры ствола мозга крыс Цель работы – проверка красителя Nuclear Yellow на применимость в качестве красителя для визуализации нейронов на гистологических срезах. В результате исследования была предложена методика флюоресцентного окрашивания с использованием красителя Nuclear Yellow, которая позволяет визуализировать в синем спектральном диапазоне как ядерные структуры, так и хроматофильную субстанцию, аналогично стандартному методу Ниссля, применяемому в светлопольной микроскопии. Метод обеспечивает повышение контраста и разрешения изображений в 1.4 раза по сравнению со световой микроскопией в проходящем свете, может быть использован для окраски парафиновых срезов с последующим заключением препаратов в перманентные среды. Краситель требует лазер с длиной волны 405 нм для возбуждения флюоресценции, который входит в комплектацию бюджетных конфокальных микроскопов. Метод доступен и прост в использовании. Также были получены спектры излучения красителя для областей ядрышка, хроматофильной субстанции, нейропиля и глиальных клеток с разной плотностью упаковки гетерохроматина. Использована прикладная программа Origin 2024b.

The object of the study is the nerve structures of the rat brainstem. The purpose of the work is to verify the applicability of Nuclear Yellow dye for the visualization of neurons in histological sections. As a result of the study, a fluorescent staining technique using Nuclear Yellow was proposed. This method enables the visualization of both nuclear structures and chromatophilic substance in the blue spectral range, similar to the standard Nissl method used in bright-field microscopy. The method provides a 1.4-fold increase in image contrast and resolution compared to transmitted-light microscopy and is suitable for staining paraffin sections followed by permanent mounting. The dye requires a 405 nm laser for fluorescence excitation, which is standard in budget-friendly confocal microscopes. The method is accessible and easy to use. Furthermore, emission spectra were obtained for specific regions, including the nucleolus, chromatophilic substance, neuropil, and glial cells with varying heterochromatin packing densities. Origin 2024b software was utilized for data analysis.

• ВВЕДЕНИЕ
• 1 Обзор литературы
  • 1.1 Физико-химические основы флуоресценции и механизмы деактивации возбужденных состояний
    • 1.1.1 Явление флюоресценции
    • 1.1.2 Диаграмма Яблонского
    • 1.1.3 Адиабатическое приближение Борна – Оппенгеймера
    • 1.1.4 Синглетные состояния, правило отбора по спину и принцип Франка – Кондона. Правило Каши
    • 1.1.5 Подробное рассмотрение схематического изображения диаграммы Яблонского
    • 1.1.6 Изменение величины стоксова сдвига вследствие сольватохромии
    • 1.1.7 Статическое и динамическое тушение флюоресценции
  • 1.2 Конфокальная микроскопия
    • 1.2.1 Устройство конфокального микроскопа
    • 1.2.2 Особенности процесса сканирования и современные технические решения
    • 1.2.3 Детекторы
    • 1.2.4 Механизмы управления световым потоком: пространственные модуляторы и сканирующие системы
    • 1.2.5 Сравнение конфокальной и традиционной светлопольной микроскопии. Диск Эйри
    • 1.2.6 Источники возбуждающего излучения в конфокальной сканирующей микроскопии
  • 1.3 Нервные структуры и их визуализация
    • 1.3.1 Макромолекулярная организация и проблемы визуализации хроматофильной субстанции нейронов
    • 1.3.2 Хроматофильная субстанция (вещество Ниссля)
    • 1.3.3 Биофизика и химический состав вещества Ниссля
    • 1.3.4 Ядро нейрона
    • 1.3.5 Ядрышко и парануклеолярные тельца нейрона
    • 1.3.6 Признаки повреждения нервной клетки
    • 1.3.7 Техника окраски по Нисслю
    • 1.3.8 Флюоресцентный краситель Nuclear Yellow
• 2 Цели и задачи работы
• 3 Методика эксперимента
• 4 Экспериментальные результаты и их обсуждение
• ЗАКЛЮЧЕНИЕ
• СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ