Details

На сегодняшний день разработка вакцинных и терапевтических стратегий, нацеленных на консервативные внутривирусные белки, в частности, нуклеопротеин, является перспективным направлением в исследованиях, в связи с ежегодной изменчивостью штаммов. Платформа мРНК-технологий успешно применялась в профилактике COVID-19, что доказало перспективность данного метода в профилактике и терапии инфекционных заболеваний. Представленная работа посвящена клонированию генов, кодирующих Fab-фрагменты антител, специфически связывающихся с нуклеопротеином вируса гриппа B, для получения внутриклеточных терапевтических мРНК. В рамках данной работы был выполнен дизайн оригинальных генетических конструкций кодирующих последовательности «лёгкой» и «тяжелой» цепей Fab-фрагмента антитела 2/3 к нуклеопротеину вируса гриппа В с нетранслируемыми областями. Методом молекулярного клонирования были получены плазмидные ДНК в клетках Escherichia coli штамма DH5α. Данные плазмиды были использованы в качестве матрицы для синтеза мРНК методом IVT при помощи T7 РНК-полимеразы. В результате работы были успешно получены синтетические мРНК, которые могут быть использованы для получения терапевтических препаратов.

Today, the development of vaccine and therapeutic strategies targeting conservative intraviral proteins, in particular, nucleoprotein, is a promising area of research, due to the annual variability of strains. The mRNA technology platform has been successfully used in the prevention of COVID-19, which has proven the promise of this method in the prevention and treatment of infectious diseases. This work is devoted to the cloning of genes encoding Fab fragments of antibodies specifically binding to the nucleoprotein of the influenza B virus to obtain intracellular therapeutic mRNAs. As part of this work, the design of original genetic constructs encoding sequences of the «light» and «heavy» chains of the Fab fragment of antibody 2/3 to the nucleoprotein of the influenza B virus with untranslated regions was carried out. Plasmid DNA was obtained by molecular cloning in cells of Escherichia coli strain DH5a. These plasmids were used as a template for mRNA synthesis by IVT using T7 RNA polymerase. As a result of the work, synthetic mRNAs have been successfully obtained that can be used to produce therapeutic drugs.