Details

Данная работа посвящена изучению АТФазной активности рекомбиназ RAD51 человека и UvsX бактериофага T6. Цель работы заключалась в сравнительной характеристике АТФазной активности рекомбиназ RAD51 человека и UvsX бактериофага T6. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи: 1. Тестирование работоспособности ферментной системы сопряженных реакций для измерения АТФазной активности спектрофотометрическим методом 2. Проведение контрольных измерений ДНК-зависимой АТФазной активности рекомбиназы RecA 3. Измерение АТФазной активности рекомбиназ RAD51 человека и UvsX бактериофага T6 в присутствии поли(dT) В результате исследований доказана потенциальная возможность использования NADH-сопряжённого спектрофотометрического метода для сравнительной характеристики АТФазной активности рекомбиназ RAD51 человека и UvsX бактериофага T6. Экспериментально подтверждено, что UvsX проявляет значительно более высокую активность (kcat ~590 мин-1) по сравнению с RAD51 человека (kcat ~0,4 мин¬-1). Было установлено, что рекомбиназа UvsX бактериофага T6 на данном этапе демонстрирует сильную зависимость от концентрации субстрата поли(dT) и требует дальнейшей оптимизации для повышения стабильности. При подготовке литературного обзора использовались базы данных PubMed, Scopus, eLibrary, ScienceDirect, Web of Science. Статистическая обработка данных проводилась с помощью программного обеспечения OriginPro.

This work is devoted to the study of the ATPase activity of human RAD51 and UvsX bacteriophage T6 recombinases. The aim of the work was to compare the ATPase activity of human RAD51 and UvsX bacteriophage T6 recombinases. To achieve this goal, the following tasks were formulated: 1. Testing the operability of the enzyme system of coupled reactions for measuring ATPase activity by the spectrophotometric method 2. Carrying out control measurements of DNA-dependent ATPase activity of recombinase RecA 3. Measurement of the ATPase activity of human RAD51 and UvsX bacteriophage T6 recombinases in the presence of poly(dT) As a result of the research, the potential possibility of using the NADH-conjugated spectrophotometric method for comparative characterization of the ATPase activity of human RAD51 and UvsX bacteriophage T6 recombinases has been proven. It has been experimentally confirmed that UvsX exhibits significantly higher activity (kcat ~700 min-1) compared to human RAD51 (kcat ~0.4 min-1). It was found that the UvsX recombinase of bacteriophage T6 at this stage demonstrates a strong dependence on the concentration of the poly(dT) substrate and requires further optimization to increase stability. The databases PubMed, Scopus, eLibrary, ScienceDirect, and Web of Science were used in the preparation of the literature review. Statistical data processing was carried out using the OriginPro software.