Details

Данная работа посвящена молекулярно-генетическому исследованию распространённости генов патогенности среди комменсальных штаммов бактерий рода Enterococcus. Предметом исследования выступает скрининг генов патогенности (asa1, efaA, espfm, gelE, sprE, fsrB, vanA, hyl) в коллекции изолятов, выделенных от здоровых добровольцев. Цель работы: оценить частоту встречаемости указанных маркеров и установить их видовую специфичность методом ПЦР в реальном времени. Методология включала выделение ДНК, оптимизацию условий ПЦР в реальном времени (оценку эффективности, подбор температуры отжига, определение предела чувствительности), видовую идентификацию штаммов из коллекции и её тестирование на наличие генов патогенности. В ходе работы проанализировано 303 штамма. Установлена низкая общая распространённость генов (наиболее часто встречались гены asa1 и gelE, по 1,38%). Выявлена видовая специфичность: у E. faecalis преобладали гены адгезии, у E. faecium и E. hirae – гены инвазии при отсутствии регуляторного fsrB, штаммы E. lactis показали наибольшее разнообразие маркеров, включая vanA. Предел детекции составил 10⁵ КОЕ/мл. Результаты применимы в микробиологической диагностике и оценке безопасности пробиотических штаммов. Сделан вывод о низком вирулентном потенциале комменсальных энтерококков и обоснована необходимость дифференцированного подхода к молекулярному контролю патогенности.

The given work is devoted tо molecular-genetic analysis of virulence gene prevalence among commensal strains of the genus Enterococcus. The research subject involves screening for virulence markers (asa1, efaA, espfm, gelE, sprE, fsrB, vanA, hyl) in isolates obtained from healthy volunteers. The objective is to evaluate the frequency and species-specific distribution of these markers using real-time PCR. The methodology comprised DNA extraction, PCR optimization (efficiency assessment, annealing temperature selection, and limit of detection determination), species identification, and virulence gene screening. A total of 303 strains were analyzed. The results indicate a low overall prevalence of virulence genes, with asa1 and gelE being the most common (1.38% each). A distinct species-specific pattern was identified: E. faecalis predominantly harbored adhesion genes, while E. faecium and E. hirae carried invasion genes without the regulatory fsrB marker. E. lactis strains demonstrated the highest genetic diversity, including the vanA resistance gene. The limit of detection was established at 10⁵ CFU/mL. The findings are applicable to microbiological diagnostics and probiotic safety assessment. It is concluded that commensal enterococci exhibit low virulent potential, justifying the implementation of a differentiated molecular approach for pathogenicity control.