Details

Работа посвящена выбору терапевтических миРНК, направленных на подавления экспрессии генов ROBO1, SLIT2, SLIT3, а также оценке эффективности катионных липосом 2X3-DOPE-PEG в качестве средства доставки терапевтических миРНК в мезенхимальные клетки сердца человека. Получены потенциальные терапевтических миРНК и выполнен их скрининг методом ПЦР-РВ на исследуемых клетках при доставке миРНК коммерческим трансфекционным реагентом xFect. Выбраны наиболее эффективные терапевтические миРНК. Проведена оценка эффективности трансфекции клеток комплексами 2X3-DOPE-PEG с модельными миРНК-Cy5.5 методами проточной цитофлуориметрии, флуоресцентной и конфокальной микроскопии. Оценена эффективность подавления целевых генов под действием выбранных терапевтических миРНК в составе комплексов с 2X3-DOPE-PEG и с xFect методом ПЦР-РВ. Показано, что эффективность трансфекции клеток комплексами 2X3-DOPE-PEG с миРНК-Cy5.5 выше, а подавление экспрессии целевых генов комплексами 2X3-DOPE-PEG с терапевтическими миРНК ниже, чем при использовании xFect. Таким образом, 2X3-DOPE-PEG могут быть использованы для доставки миРНК, однако необходима оптимизация условий для повышения эффективности трансфекции. Использовалось программное обеспечение: LAS X (Leica), Kaluza Analysis, GraphPad Prism, Microsoft Office (Word, Excel); базы данных PubMed, Google Scholar; электронные ресурсы библиотеки СПбПУ.

This study focuses on selecting therapeutic siRNAs aimed at suppressing the expression of ROBO1, SLIT2, and SLIT3 genes, as well as evaluating the efficiency of cationic liposomes 2X3-DOPE-PEG as a delivery system for these therapeutic siRNAs into human cardiac mesenchymal cells. Potential therapeutic siRNAs were identified and screened by RT-PCR on the target cells after delivery of the siRNAs using the commercial transfection reagent xFect. The most effective therapeutic siRNAs were selected. Transfection efficiency of cells with 2X3-DOPE-PEG complexes loaded with model Cy5.5-labeled siRNAs was assessed using flow cytometry, fluorescence microscopy, and confocal microscopy. The knockdown efficiency of target genes induced by the selected therapeutic siRNAs delivered as part of 2X3-DOPE-PEG complexes and by xFect was evaluated using RT-PCR. It was shown that the transfection efficiency of cells with 2X3-DOPE-PEG complexes carrying Cy5.5-labeled siRNAs was higher, whereas the suppression of target gene expression by 2X3-DOPE-PEG complexes carrying therapeutic siRNAs was lower compared to xFect. Thus, 2X3-DOPE-PEG complexes can be used for siRNA delivery; however, optimization of conditions is required to enhance transfection efficiency. The following software and resources were used: LAS X (Leica), Kaluza Analysis, GraphPad Prism, Microsoft Office (Word, Excel); PubMed and Google Scholar databases; electronic resources of the St. Petersburg Polytechnic University Library.