Details

Данная работа посвящена совершенствованию протоколов криоконсерва-ции и культивирования клеточной линии MRC-5 для повышения ее жизнеспо-собности и функциональной стабильности. Задачи, которые решались в ходе исследования:  Провести анализ литературных источников и систематизировать ин-формацию о механизмах криоповреждения, принципах действия криопротекто-ров, и стандартных подходах к криоконсервации клеточной линии MRC-5.  Экспериментально определить состав криозащитной среды, обеспе-чивающий максимальную жизнеспособность после размораживания.  Оценить морфологическую стабильность клеток после криоконсер-вации и выявить возможные признаки критического повреждениях при различ-ных комбинациях компонентов криосреды.  Исследовать пролиферативную активность размороженных клеток в зависимости от состава криопротекторной среды и концентрации сыворотки в ростовой среде, определив условия наилучшего культивирования.  Разработать практические рекомендации по совершенствованию протоколов криоконсервации и культивирования клеточной линии MRC-5, обес-печивающие высокие показатели выживаемости, стабильный рост и экономиче-скую эффективность. Объект исследования – диплоидная клеточная линия фибробластов лёгкого эмбриона человека MRC-5 (Medical Research Council cell strain 5). Работа выполнена на базе микробиологической лаборатории ООО «Компа-ния Алкор Био». Анализируемыми параметрами были технологические парамет-ры криоконсервации (тип и концентрация криопротектора, скорость охлаждения, метод отогрева) и условия культивирования (состав ростовой среды, концентра-ция сыворотки, процент конфлюэнтности), обеспечивающие максимальную жизнеспособность и стабильность диплоидной линии MRC-5. В ходе исследования установлено, что концентрация диметилсульфоксида является определяющим фактором выживаемости клеток MRC-5. Наилучшие результаты достигаются при использовании 10 % DMSO. Использование полной ростовой среды DMEM с добавлением 12 % FBS обеспечивает максимальную длительность культивирования и стабильную кинетику роста при сниженном расходе сыворотки. Для достижения цели работы были использованы следующие информаци-онные технологии: eLIBRARY.RU, ElsrvierScinceDirect, Scopus, ResearchGate, PubMed. Для анализа и обработки результатов был использован Microsoft Excel.

This work is dedicated to improving the technical protocols for the cryopreser-vation and culture of the MRC-5 cell line in order to enhance their viability and functional stability. Objectives addressed during the study:  To analyse the literature and systematise information on the mechanisms of cryodestruction, the principles of cryoprotectants, and standard approaches to the cryopreservation of the MRC-5 cell line;  Experimentally determine the composition of the cryoprotective medi-um that ensures maximum viability after thawing;  Assess the morphological stability of cells after cryopreservation and identify possible signs of critical damage under various combinations of cryoprotec-tive medium components;  To investigate the proliferative activity of thawed cells depending on the composition of the cryopreservation medium and the serum concentration in the growth medium, thereby identifying the optimal cultivation conditions;  To develop practical recommendations for improving cryopreservation and culture protocols for the MRC-5 cell line, ensuring high survival rates, stable growth and cost-effectiveness. The subject of the study was the MRC-5 (Medical Research Council cell strain 5) diploid human embryonic lung fibroblast cell line. The work was carried out at the microbiology laboratory of Alcor Bio Compa-ny Ltd. The parameters analysed were the cryopreservation parameters (type and concentration of cryoprotectant, cooling rate, thawing method) and culture condi-tions (composition of the growth medium, serum concentration, confluence percent-age), ensuring maximum viability and stability of the MRC-5 diploid cell line. The study found that the concentration of dimethyl sulfoxide is a determining factor in the survival of MRC-5 cells. The best results are achieved when using 10 % DMSO. The use of complete DMEM medium supplemented with 12 % FBS ensures maximum culture duration and stable growth kinetics with reduced serum consump-tion. The following information technologies were used to achieve the aim of the study: eLIBRARY.RU, Elsevier ScienceDirect, Scopus, ResearchGate, PubMed. Mi-crosoft Excel was used for the analysis and processing of the results.