Details

Работа посвящена изучению ростовых характеристик, динамики клеточного цикла и субклеточной организации дермальных фибробластов доноров с болезнью Хантингтона (БХ). В исследовании сравнивали пары клеточных линий, полученных от пациентов с БХ и здоровых доноров с соответствующими полом и возрастом. Ростовые характеристики оценивали по кривым роста и колониеобразующей способности. Субклеточную локализацию polyQ-содержащего хантингтина (HTT) анализировали методом иммунофлуоресцентного окрашивания с помощью конфокальной микроскопии. Для оценки динамики клеточного цикла использовали флуоресцентный индикатор клеточного цикла на основе убиквитинирования(FUCCI). Полученные результаты показали, что линии БХ отличаются от контрольных клеток по ростовым параметрам, и локализации HTT. В клетках пациентов отмечалось снижение ядерной локализации polyQ сигнала. Воздействие лептомицина B, ингибитора ядерного экспорта, изменяло распределение HTT и в БХ-фибробластах сопровождалось формированием многоядерных клеток, что может указывать на участие нарушений ядерно- цитоплазматического транспорта в формировании наблюдаемого фенотипа. Таким образом, дермальные фибробласты пациентов с болезнью Хантингтона могут рассматриваться как клеточная модель для изучения проявлений заболевания в периферических тканях и связи между количеством CAG-повторов в HTT и клеточным фенотипом.

This work examines the growth characteristics, cell cycle dynamics, and subcellular organization of dermal fibroblasts from donors with Huntington’s disease (HD). Particular attention is paid to analyzing cell proliferative activity, the distribution of polyQ-containing forms of huntingtin (HTT), and changes in signal localization upon exposure to the nuclear export inhibitor leptomycin B. This work analyzed dermal fibroblast cell lines from donors with HD and age- and sex-matched control cell lines. Fibroblast growth characteristics were assessed using growth curves and proliferation indices, while subcellular organization was assessed using immunofluorescence staining and confocal microscopy. To assess cell cycle dynamics, a genetic construct based on the FUCCI system was used, allowing for tracking cell cycle transitions in living cells. The results showed that dermal fibroblasts from HD donors may differ from control cells in growth parameters, colony-forming capacity, and subcellular localization of HTT. Changes in the subcellular localization of HTT, specifically a decrease in the nuclear localization of the protein, were detected in patient cells. Treatment with leptomycin B, which inhibits nuclear protein export, led to changes in HTT localization and, in patient fibroblasts, induced the formation of multinucleated cells, indicating the possible involvement of nucleocytoplasmic transport mechanisms in the formation of the observed phenotype. Thus, dermal fibroblasts from HD patients can be considered as a cellular model for studying the molecular aspects of pathogenesis in peripheral tissues, as well as for studying the relationship between the number of repeats in HTT and cell phenotype.