Details

Данная работа посвящена характеризации комплекса JetABC Escherichia coli. Комплекс JetABC является основной частью SMC-подобного комплекса Wadjet. Исследуемый в данной работе комплекс Wadjet существенно отличается от уже изученных по аминокислотной последовательности и ранее не был охарактеризован в условиях in vitro. Исследование данного комплекса поможет установить его состав и характер взаимодействия с ДНК, что может быть использовано в будущем в том числе для создания новых антибактериальных агентов. В данной работе методами жидкостной хроматографии были выделены отдельные белки комплекса JetA и JetB и полный комплекс JetABC. Использование хроматографических методов и денситометрического анализа позволило определить массу комплекса JetABC и его возможную стехиометрию. Применение метода анализа сдвига электрофоретической подвижности позволило определить влияние состава буфера, а также влияние отдельных белков комплекса JetABC на эффективность связывания комплекса с ДНК. Применение со-осаждения комплекса JetABC с белками E. coli с последующим анализом с помощью масс-спектрометрии позволило определить потенциальные белки-партнёры комплекса JetABC. Применение одномолекулярных методов позволило подтвердить ДНК-связывающую способность комплекса JetABC.

The given work is devoted to characterization of JetABC Complex of Escherichia coli. JetABC complex is the main part of SMC-like Wadjet complex. The Wadjet complex that has been used in this study has not been studied in vitro as of yet and has a vastly different amino acid sequence from Wadjet complexes that has already been studied. The study of this complex will help in determining its composition and the way it interacts with DNA which can be used among other things in creating new antibacterial agents in the future. In this study we used liquid chromatography methods to purify proteins JetA and JetB and JetABC complex. The usage of chromatographic methods and densitometric analysis allowed to determine the molecular weight of JetABC complex and its estimated stoichiometry. We used electrophoretic mobility shift assay allowed to determine the influence the components of the buffer and individual proteins that compose JetABC complex has on efficiency of DNA-binding ability of JetABC complex. We used co-precipitation of JetABC complex and E. coli proteins and subsequent mass- spectrometry to determine potential partner proteins of JetABC complex. We used single-molecular experiments and fluorescent microscopy to analyse DNA-binding ability of JetABC complex.