Details

Данная работа посвящена оценке маркерных свойств пула молекул микроРНК и пиРНК методом микрочиповой ПЦР с целью создания панели, применимой в диагностике цервикальной интраэпителиальной неоплазии тяжелой степени. В ходе работы было проведено выделение РНК из гистологических и цитологических образцов неизмененного цервикального эпителия и эпителия с интраэпителиальным поражением тяжелой степени, выбор пула потенциально маркерных молекул малых РНК на основании результатов секвенирования, разработка и проверка аналитических характеристик полиА-ОТ-ПЦР систем для выбранных 50 молекул, оценка их уровней экспрессии в гистологических образцах, оптимизация проведения анализа, включая дизайн флуоресцентного молекулярного маяка и внесение тачдаун-этапа в протокол ПЦР, а также последующий анализ молекул в цитологических образцах. На основе полученных данных была сформирована панель из 13 молекул микроРНК и 2 пиРНК с высоким диагностическим потенциалом. Результаты работы могут быть использованы для дальнейшего создания и применения в клинической практике диагностического теста в формате микрочипа для выявления цервикальной интраэпителиальной дисплазии тяжелой степени.

This work is devoted to the assessment of the marker properties of a pool of microRNA and piRNA molecules by microarray PCR in order to create a panel applicable in the diagnosis of severe cervical intraepithelial neoplasia. In the course of the work, RNA was isolated from histological and cytological samples of unchanged cervical epithelium and epithelium with severe intraepithelial damage, a pool of potentially marker small RNA molecules was selected based on sequencing results, the analytical characteristics of polyA-RT-PCR systems for selected 50 molecules were developed and verified, molecules expression levels in histological samples were evaluated, and optimization of the analysis, including the design of a fluorescent molecular beacon and the introduction of a touchdown stage in the PCR protocol, as well as subsequent analysis of molecules in cytological samples. Based on the data obtained, a panel of 13 microRNAs and 2 piRNAs with high diagnostic potential was formed. The results of the work can be used for further creation and application in clinical practice of a diagnostic test in the microchip format for detecting high-grade cervical intraepithelial neoplasia.