Details

Целью работы являлась разработка системы редактирования генома бактериофага Т7 для интеграции гена токсичного белка SulA и получения рекомбинантного фага с антибактериальным действием. В работе были использованы методы молекулярной биологии и генетической инженерии, включая ПЦР, электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле, сборку генетических конструкций методами Gibson Assembly и CPEC, химическую трансформацию бактериальных клеток, секвенирование по Сэнгеру и методы культивирования бактериофагов. В результате выполнения проекта была разработана схема двухэтапной интеграции гена sulA в геном бактериофага Т7. Были созданы генетические конструкции для первого этапа редактирования, получен рекомбинантный фаг, содержащий последовательность промотора и половину гена sulA. Была получена плазмида с матрицей для гомологичной рекомбинации, содержащая оставшуюся часть гена токсичного белка, а также фрагменты для сборки плазмиды, несущей спейсер к модифицированному T7. Полученные результаты могут быть использованы для получения рекомбинантных бактериофагов, предназначенных для направленной доставки токсичных белков в бактериальные клетки, что открывает перспективы для терапии инфекций, вызванных антибиотикорезистентными штаммами E. coli. В работе были использованы научные базы данных PubMed, PubMed Central, Springer Science, а также такие программы и сервисы, как SnapGene и BLAST (Basic Logical Alignment Tool) NCBI.

The aim of this study was to develop a genome editing system for bacteriophage T7 to integrate the gene encoding the toxic protein SulA and to obtain a modified phage with antimicrobial activity. The study employed molecular biology and genetic engineering techniques, including polymerase chain reaction (PCR), agarose gel electrophoresis of nucleic acids, Gibson Assembly, circular polymerase extension cloning (CPEC), chemical transformation of bacterial cells, Sanger sequencing, and bacteriophage cultivation methods. As a result of the study, a two-step strategy for integrating sulA gene into bacteriophage T7’s genome was developed. Genetic constructions required for the first step of genome editing were created. A recombinant phage carrying the promoter sequence and the first half of the sulA gene was obtained. Furthermore, a plasmid containing a homologous recombination template with the remaining part of toxic protein gene was constructed. Fragments required for assembly of a plasmid carrying a spacer targeting the modified T7 phage were also obtained. These results can be applied in the development of engineered phages for targeted delivery of toxic proteins into bacterial cells, providing new opportunities for the treatment of infections caused by resistant strains of E. coli. Scientific databases such as PubMed, PubMed Central, and Springer Science, as well as programs and services such as SnapGene and BLAST (Basic Logical Alignment Tool) from NCBI, were used.

• 07660f6da38415785065ba80b6d3204cbb8640590aef5954ea230aa491d32d9b.pdf
• 07660f6da38415785065ba80b6d3204cbb8640590aef5954ea230aa491d32d9b.pdf