Details
| Title | Получение термостабильных форм глюкоамилазы гриба A. awamori X100 методами направленной эволюции: магистерская диссертация: 03.04.02 |
|---|---|
| Creators | Соболева Елена Валентиновна |
| Scientific adviser | Сергеев Владимир Ремирович; Суржик Марина Аркадьевна |
| Organization | Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого. Институт физики, нанотехнологий и телекоммуникаций |
| Imprint | Санкт-Петербург, 2017 |
| Collection | Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция |
| Document type | Master graduation qualification work |
| File type | Other |
| Language | Russian |
| Level of education | Master |
| Speciality code (FGOS) | 03.04.02 |
| Speciality group (FGOS) | 030000 - Физика и астрономия |
| Rights | Текст не доступен в соответствии с распоряжением СПбПУ от 13.07.2016 № 91 |
| Record key | RU\SPSTU\edoc\52708 |
| Record create date | 4/27/2018 |
Целью настоящей работы являлось получение в клетках Pichia pastoris рекомбинантных форм глюкоамилазы, обладающих высокой каталитической активностью и повышенной термостабильностью по сравнению с белком дикого типа. В данной работе был проведён случайный мутагенез части гена ГА, кодирующей каталитический домен, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с увеличенной частотой ошибок. Продукты ПЦР были заклонированы в новую эписомную плазмиду pPEH?, сконструированную сотрудниками ОМРБ ПИЯФ, и экспрессированы в клетках GS115 Pichia pastoris. В результате скрининга 3000 дрожжевых клонов было отобрано 5 клонов, которые экспрессировали ГА с повышенной термостабильностью. Данные белки были очищены, после чего были определены их константы инактивации в широком диапазоне температур от 68 до 80оС. Результаты измерений показали, что полученные мутантные формы глюкоамилазы F7, С8, F5m2, E5 и B5m обладали повышенной термостабильностью по сравнению с белком дикого типа. Результаты секвенирования выявили следующие аминокислотные замены в найденных белках: F7 (Leu***Met, His***Tyr), С8 (Val***Asp), F5m2 (Thr***Ala), E5 (Thr***Ala, Ser436Pro) и B5m (Val59Ala, Asn80Ser, Ser394Arg).
