Тема выпускной квалификационной работы: «Характеристика рекомбинантных белков на основе SAP, несущих консервативные фрагменты белков вируса гриппа A». Рекомбинантные белки на основе SAP, исследуемые в работе, включали следующие целевые антигены: эктодомен белка М2 (М2е), фрагмент гемагглютинина (HA) ак 76-130 и 2 фрагмента белка NP ‒ ак 255-275 и ак 335-350. Были сконструированы 4 варианта рекомбинантных белков: NP(-), NP(255), NP(335) и NP(335+255). Была проведена физико-химическая характеристика рекомбинантных белков. По результатам предсказания вторичной и третичной структуры в серверах PSIPRED и С-QUARK было показано, что фрагменты SAP и НА76-130 не полностью сохраняют свою нативную структуру в рекомбинантных белках. Показано, что молекулярная масса белков по их электрофоретической подвижности соответствует их теоретической молекулярной массе. Белки обладают достаточной степенью отчистки. Выявлено, что гидродинамический диаметр частиц, образуемых исследуемыми белками, составил от 47 до 107 нм. Результаты исследования иммуногенности белков показали, что белок NP(-) при интраназальном введении мышам индуцировал высокий уровень выработки специфических антител, а также обеспечил достаточную защиту при летальном заражении вирусами гриппа А/H1N1 A/H3N2. Рекомбинантные белки NP(255), NP(335) и NP(335+255) при интраназальном введении стимулировали слабое формирование специфических антител и имели низкую протективную эффективность. Адъювант Sepivac SWE усилил иммуногенность белка NP(335) при внутримышечном введении.

The subject of the graduate qualification work is «Characterization of SAP-based recombinant proteins carrying conserved fragments of influenza A virus proteins». In this study the ectodomain of protein M2 (M2e), HA76-130 fragment and two regions of NP protein (NP255-275 и NP335-350) were chosen as targeted antigens. Based on antigen recombination four version of SAP-based recombinant proteins were constructed designated as NP(-), NP(255), NP(335) and NP(335+255). Physico-chemical characterization was conducted. Results of secondary and tertiary structure prediction showed that the structure of SAP and НА fragments in recombinant proteins are not fully aligned with literature data. The hydrodynamic diameter of the particles formed by proteins ranged from 47 to 107 nm. It was shown that proteins had a sufficient degree of purification and proteins molecular weight according to their electrophoretic mobility complied with its theoretical molecular weight. Immunogenicity research shown that the intranasal administration of NP(-) protein stimulated strong antibodie-mediated immune response and provides complete protection of mice infected with a lethal dose of the H3N2 and H1N1 subtype virus. The intranasal administration of NP(255) and NP(335+255) proteins induced poor formation of specific antibodies and did not provide protection against lethal infection. The significant T-cell response formation was not detected. NP(335) protein administrated intranasally showed low immunogenicity. Sepivac SWE adjuvant enhanced NP(335) protein immunogenicity following intramuscular administration.