Details

Данная работа посвящена созданию штаммов-продуцентов фермента кутиназы, способного утилизировать биоразлагаемые отходы, на основе культуры метилотрофных дрожжей Pichia pastoris и микроводоросли Chlamydomonas reinhardtii. В рамках этой цели решались следующие задачи: Клонирование и экспрессия потенциальных генов кутиназ в P. рastoris, выявление последовательности с экспрессией гена фермента с наибольшей ферментативной активностью и конструирование штамма-продуцента на основе клеток дрожжей. Создание штамма-продуцента эндонуклеазы Cas9 и выделение соответствующего белка для конструирования продуцента на основе микроводорослей Chlamydomonas В качестве объекта исследования выступал микроорганизм из коллекции лаборатории биотехнологий Петербургского института ядерной физики им. Б.П. Константинова, НИЦ «Курчатовский институт»: Aureobasidium pullulans ВКМ 1116. Предметом исследования является выявление генов, кодирующих кутиназы, белков, обладающих поликапролактон-деградирующей активностью, в клетках штамма A. pullulans ВКМ 1116. Работа выполнена на базе лаборатории биотехнологии Петербургского института ядерной физики им. Б. П. Константинова, НИЦ «Курчатовский институт» При написание литературного обзора использовались следующие базы данных Scopus, PubMed, Elibrary. В ходе работы были получены: штамм-продуцент кутиназы на основе метилотрофных дрожжей Pichia pastoris, установлена кутиназная активность с использованием специфического субстрата; продуцент эндонуколеазы Cas 9 на основе бактериальной культуры E. coli, выделен фермент, установлена его активность.

Current work is devoted to development of strains producing enzyme cutinase, capable of utilizing biodegradable waste, based on the culture of methylotrophic yeast Pichia pastoris and microalgae Chlamydomonas reinhardtii.  Within this goal, the following objectives were pursued: Cloning and expression of potential cutinase genes in P. prastoris, identification of the sequence with expression of the enzyme gene with the highest enzymatic activity and construction of a yeast cell-based producer strain. Creation of a Cas9 endonuclease producer strain and isolation of the corresponding protein for the construction of a producer strain based on Chlamydomonas microalgae. The object of the study was a microorganism from the collection of the biotechnology laboratory of the St. Petersburg Institute of Nuclear Physics named after B.P. Konstantinov. Aureobasidium pullulans VKM 1116. The subject of the study is the identification of genes encoding cutinases, proteins possessing polycaprolactone-degrading activity, in cells of A. pullulans strain VKM 1116. The work was carried out at the Laboratory of Biotechnology of the St. Petersburg Institute of Nuclear Physics named after B. P. Konstantinov., SIC “Kurchatov Institute” The following databases Scopus, PubMed, Elibrary were used in the literature review. In the course of work were obtained: a strain-producer of cutinase on the basis of methylotrophic yeast Pichia pastoris, the cutinase activity was established using a specific substrate; a producer of endonuclease Cas 9 on the basis of bacterial culture of E. coli., the enzyme was isolated and its activity was determined.