Details

Данная работа посвящена созданию вектора для конститутивной экспрессии зеленого флуоресцентного белка mBaoJin с ядерной локализацией в растительных тканях для его изучения в качестве скринингового маркера. Задачи, которые решались в ходе исследования: - клонировать нуклеотидную последовательность, кодирующую белок mBaoJin, слитый с гистоном человека H2B, в вектор назначения системы Gate-way pUC18-entry8; - клонировать последовательность H2B-mBaoJin в вектор назначения системы Gateway pB7WG2R через LR-клоназную реакцию; - трансформировать вектор pB7WG2R-H2B-mBaoJin в клетки агробактерии Agrobacterium rhizogenes R1000. - трансформировать растения огурца Cucumis sativus полученным трансгенным штаммом A. rhizogenes R1000 со вставкой вектора pB7WG2R-H2B-mBaoJin с получением композитных растений; - проанализовать распределение флуоресцентного белка mBaoJin в тканях трансгенного кончика корня огурца методом конфокальной микроскопии. Объект исследования – семена огурца (Cucumis sativus) сорта Феникс. Работа выполнена на базе лаборатории клеточных и молекулярных механизмов развития растений, БИН РАН. Анализируемым параметром было распределение флуоресцентного белка mBaoJin в трансгенных тканях корня огурца. В ходе исследования был получен вектор для конститутивной экспрессии зеленого флуоресцентного белка mBaoJin и установлено, что белок стабильно экспрессируется в растительных тканях, и, следовательно, пригоден для использования в качестве скринингового или репортерного маркера при трансформации растений. Для достижения данных результатов в работе были использованы следую-щие информационные технологии: программное обеспечение Image Lab, Vector NTI™ Advance, ZENv2.3, SnapGene, Adobe Photoshop, Microsoft Word, базы данных PubMed, ResearchGate, Sci-Hub и прочие.

This work is devoted to the creation of a vector for the constitutive expression of the green fluorescent protein mBaoJin with nuclear localization in plant tissues for its study as a screening marker. Tasks that were solved during the research: - clone the nucleotide sequence encoding the mBaoJin protein fused with human histone H2B into the destination vector of the Gateway pUC18-entry8 system; - clone the H2B-mBaoJin sequence into the destination vector of the Gateway pB7WG2R system via the LR-clonase reaction; - transform the pB7WG2R-H2B-mBaoJin vector into cells of the Agrobacterium rhizogenes R1000. - transform Cucumis sativus cucumber plants with the obtained transgenic strain A. rhizogenes R1000 with the insertion of the pB7WG2R-H2B-mBaoJin vector to obtain composite plants; - to analyze the distribution of the mBaoJin fluorescent protein in the tissues of the transgenic tip of the cucumber root by confocal microscopy. The object of the study is seeds of cucumber (Cucumis sativus) of the Phoenix variety. The work was performed on the basis of the Laboratory of Cellular and molecular mechanisms of Plant development, BIN RAS. The analyzed parameter was the distribution of the mBaoJin fluorescent protein in transgenic cucumber root tissues. During the study, a vector for the constitutive expression of the green fluorescent protein mBaoJin was obtained and it was found that the protein is stably expressed in plant tissues, and, therefore, is suitable for use as a screening or reporter marker during plant transformation. To achieve these results, the following information technologies were used in the work: Image Lab software, Vector NTI Advance, ZENv2.3, SnapGene, Adobe Pho-toshop, Microsoft Word, PubMed databases, ResearchGate, Sci-Hub and others.