Details

Title: Биотинилирование рекомбинантного стрептавидина в клеточных фракциях E.coli: магистерская диссертация: 03.04.02
Creators: Зотова Дарья Викторовна
Scientific adviser: Сергеев Владимир Ремирович; Поляков Д. С.
Organization: Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого. Институт физики, нанотехнологий и телекоммуникаций
Imprint: Санкт-Петербург, 2017
Collection: Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция
Subjects: Белки; Клетка (биол); активный стрептавидин; стрептавидин-биотиновый комплекс; биотинилирование; пептиды
UDC: 577.164.187(043.3)
Document type: Master graduation qualification work
File type: PDF
Language: Russian
Speciality code (FGOS): 03.04.02
Speciality group (FGOS): 030000 - Физика и астрономия
Links: http://doi.org/10.18720/SPBPU/2/v18-652

Allowed Actions: Read Download (1.3 Mb) You need Flash Player to read document

Group: Anonymous

Network: FL SPbPU Local Network

Annotation

Целью работы является получение активного рекомбинантного стрептавидина без использования денатурации и ренатурации получаемого белка. В качестве вектора для экспрессии стрептавидина использовалась плазмида pET22b(+), для наработки бактериальной массы использовались штаммы E.coli BL21(DE3) и BL21(DE3)pLysS. Стрептавидин, полученный с помощью генетической конструкции с PelB-лидерным пептидом, локализируется в различных фракциях E.coli в зависимости от температурного режима индукции синтеза белка IPTG. При температуре индукции 26°С активный стрептавидин локализируется в значимом количестве в культуральной среде. При температуре индукции 16°С активный стрептавидин локализируется в значимом количестве в растворимой фракции клетки. Стрептавидин, полученный с помощью генетической конструкции без pelB-лидерного пептида, в значительном количестве найден в тельцах включения. При использовании штамма продуцента E.coli BL21(DE3)pLysS для синтеза стрептавидина сцепленного с pelB-лидерным пептидом не удалось выделить целевой белок ни из одной клеточной фракции, ни из культуральной среды. Активный стрептавидин использован для получения конъюгатов с пероксидазой хрена.

Document access rights

Network User group Action
-> FL SPbPU Local Network All Read Print Download
Internet All Read Print Download

Document usage statistics

stat Document access count: 499
Last 30 days: 21
Detailed usage statistics