Данная работа посвящена изучению механизма действия неканонической невирионной ДНК-зависимой РНК-полимеразы бактериофага phiKZ. Она состоит из 4 субъединиц, частично гомологичных двум каталитическим субъединицам бактериальной РНКП, и 5 субъединицы без гомологов с известной функцией. В лаборатории ведется исследование роли пятой субъединицы в комплексе нвРНКП. Ранее было показано, что вероятно пятая необходима для сборки активной нвРНКП и принимает участие во взаимодействие с ДНК.. Метод ограниченного протеолиза был применен для исследования ДНК-белковых комплексов нвРНКП с разными типами ДНК-матриц. Было показано, что связывание с ДНК уменьшает образование протеализированного фрагмента пятой субъединицы, соответствующего 1-382 аа. С целью исследования на что еще влияет С-конец пятой субъединицы были проведены эксперименты по получению комплекс, образованного из него и 4х субъединичной полимеразы in vivo. В ходе работы было выяснено, что C-конец пятой субъединицы необходим во время взаимодействия с ДНК-матрицами и особенно при взаимодействие с «длинными» ДНК матрицами, а также он важен на этапе сборки фермента in vivo.

The given work is devoted to study of the mechanism of action of the non-canonical non-virion DNA-dependent RNA-polymerase encoded by giant bacterio-phage phiKZ. It consists of 4 subunits which are homologs of two catalytic subunits of bacterial RNAP, and 5th subunit which have not homologs with a known function. The role of the fifth subunit in the nvRNKP complex is investigated at the laboratory. It was shown that the fifth is necessary for the assembly of active nvPNKP and takes part in interaction with DNA. The limited proteolysis method was used to investigate DNA-protein complex-es of nvPNAP with different types of DNA-matrices. Binding with DNA reduce the formation of a protealized fragment of the fifth subunit corresponding to 1-382 aa. In order to study what else is affected by the C-terminal of the fifth subunit, experiments were carried out to emit the complex formed from it and the 4x subunit polymerase in vivo. It was determined that the C-end of the fifth subunit is necessary during interac-tion with DNA and especially during interacting with "long" DNA, and it is also im-portant for the assembly of enzyme in vivo.

• ecd668c5957568acdb33070971393c0dea0366acbc29e25472aeab086a99a0cc.pdf
• САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
• ecd668c5957568acdb33070971393c0dea0366acbc29e25472aeab086a99a0cc.pdf