Details

В данной работе была проведена характеризация нуклеазы PpCas9 из бактерии Pasteurella pneumotropica путем проведения экспериментов in vitro. Результаты работ показали активность PpCas9 в разрезании ДНК in vitro. В ходе работ были определены температурный диапазон работы нуклеазы PpCas9, паттерн разрезания ею ДНК-мишеней и требования нуклеазы к РАМ-последовательности (5’-NNNNRT-3’). Также нами была создана форма PpCas9, никирующая ДНК. Охарактеризованный в данной работе белок PpCas9 был использован для создания системы праймированного редактирования генома эукариот, однако созданная система не продемонстрировала эффективности в точном редактировании ДНК клеток человека.

In this work, we characterized PpCas9 nuclease from Pasteurella pneumo-tropica by in vitro experiments. The results of the work showed that PpCas9 is ac-tive in vitro and can introduce double stranded breaks in DNA. In addition, we de-termined the temperature requirements for the PpCas9 nuclease activity, the pattern of PpCas9 DNA cleavage and the requirements for the PAM sequence (5'-NNNNRT-3 ') in vitro. Also we created a PpCas9 mutant form, which nicks DNA. The PpCas9 protein characterized in this work was used to create a system for Prime editing of eukaryotic genome. Unfortunately the created system did not demonstrate the efficient precise editing of genomic DNA in human cells.