Details

Title: Характеризация нуклеазы PpCas9 из бактерии Pasteurella pneumotropica in vitro и ее применение для праймированного редактирования ДНК: выпускная квалификационная работа магистра: направление 16.04.01 «Техническая физика» ; образовательная программа 16.04.01_10 «Медицинская биотехнология»
Creators: Казалов Максим Алексеевич
Scientific adviser: Ходорковский Михаил Алексеевич
Other creators: Октябрьский Валерий Павлович; Федорова Яна Витальевна
Organization: Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого. Институт биомедицинских систем и биотехнологий
Imprint: Санкт-Петербург, 2021
Collection: Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция
Subjects: Молекулярная биология; Белки; Бактерии; редактирование генома; праймированное редактирование; genome editing; prime editing
UDC: 577.2; 577.112; 578.81; 579
Document type: Master graduation qualification work
File type: PDF
Language: Russian
Level of education: Master
Speciality code (FGOS): 16.04.01
Speciality group (FGOS): 160000 - Физико-технические науки и технологии
Links: Отзыв руководителя; Рецензия; Отчет о проверке на объем и корректность внешних заимствований
DOI: 10.18720/SPBPU/3/2021/vr/vr21-1902
Rights: Доступ по паролю из сети Интернет (чтение, печать, копирование)
Record key: ru\spstu\vkr\15193

Allowed Actions:

Action 'Read' will be available if you login or access site from another network Action 'Download' will be available if you login or access site from another network

Group: Anonymous

Network: Internet

Annotation

В данной работе была проведена характеризация нуклеазы PpCas9 из бактерии Pasteurella pneumotropica путем проведения экспериментов in vitro. Результаты работ показали активность PpCas9 в разрезании ДНК in vitro. В ходе работ были определены температурный диапазон работы нуклеазы PpCas9, паттерн разрезания ею ДНК-мишеней и требования нуклеазы к РАМ-последовательности (5’-NNNNRT-3’). Также нами была создана форма PpCas9, никирующая ДНК. Охарактеризованный в данной работе белок PpCas9 был использован для создания системы праймированного редактирования генома эукариот, однако созданная система не продемонстрировала эффективности в точном редактировании ДНК клеток человека.

In this work, we characterized PpCas9 nuclease from Pasteurella pneumo-tropica by in vitro experiments. The results of the work showed that PpCas9 is ac-tive in vitro and can introduce double stranded breaks in DNA. In addition, we de-termined the temperature requirements for the PpCas9 nuclease activity, the pattern of PpCas9 DNA cleavage and the requirements for the PAM sequence (5'-NNNNRT-3 ') in vitro. Also we created a PpCas9 mutant form, which nicks DNA. The PpCas9 protein characterized in this work was used to create a system for Prime editing of eukaryotic genome. Unfortunately the created system did not demonstrate the efficient precise editing of genomic DNA in human cells.

Document access rights

Network User group Action
ILC SPbPU Local Network All Read Print Download
External organizations N2 All Read
External organizations N1 All
Internet Authorized users SPbPU Read Print Download
Internet Authorized users (not from SPbPU, N2) Read
Internet Authorized users (not from SPbPU, N1)
-> Internet Anonymous

Usage statistics

stat Access count: 3
Last 30 days: 0
Detailed usage statistics