Details

Title: Создание средств генетической инженерии эукариот на основе малоразмерных Cas9 нуклеаз: выпускная квалификационная работа магистра: направление 16.04.01 «Техническая физика» ; образовательная программа 16.04.01_10 «Медицинская биотехнология»
Creators: Абрамова Марина Викторовна
Scientific adviser: Ходорковский Михаил Алексеевич
Other creators: Октябрьский Валерий Павлович; Федорова Яна Витальевна
Organization: Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого. Институт биомедицинских систем и биотехнологий
Imprint: Санкт-Петербург, 2021
Collection: Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция
Subjects: Клетка (биол.); Биотехнология; Иммунология; редактирование генома; genome editing
UDC: 576.3; 573.6; 616-097
Document type: Master graduation qualification work
File type: PDF
Language: Russian
Level of education: Master
Speciality code (FGOS): 16.04.01
Speciality group (FGOS): 160000 - Физико-технические науки и технологии
Links: Отзыв руководителя; Рецензия; Отчет о проверке на объем и корректность внешних заимствований
DOI: 10.18720/SPBPU/3/2021/vr/vr21-2131
Rights: Доступ по паролю из сети Интернет (чтение, печать, копирование)
Record key: ru\spstu\vkr\15207

Allowed Actions:

Action 'Read' will be available if you login or access site from another network Action 'Download' will be available if you login or access site from another network

Group: Anonymous

Network: Internet

Annotation

Данная работа посвящена созданию средств генетической инженерии эукариот на основе нуклеаз PpCas9 из Pasteurella pneumotropica и DfCas9 из Defluviimonas sp.20V17. В ходе работы были созданы эукариотические векторы, несущие CRISPR-PpCas9 и CRISPR-DfCas9 системы, была осуществлена проверка нуклеазной активности изучаемых систем в клетках человека HEK293T. CRISPR-DfCas9 система не показала эффективного редактирования генома клеток, в то время как CRISPR-PpCas9 оказалась способна вносить двунитевые разрывы в ДНК клеток человека. Эффективность работы CRISPR-PpCas9 системы была повышена путем подбора оптимальной длины спейсерной части направляющих РНК. Для доставки CRISPR-PpCas9 в живые организмы в виде AAV мы смогли максимально уменьшить размер векторной конструкции, несущей систему, и упаковать ее в вирусные капсиды. Таким образом, в результате данной работы было создано новое средство генетической инженерии эукариот на основе нуклеазы PpCas9 из Pasteurella pneumotropica – малоразмерная система, направленно вносящая разрывы в геномную ДНК клеток человека.

This work is devoted to the development of genome editing tools based on the nucleases PpCas9 from Pasteurella pneumotropica and DfCas9 from Defluviimonas sp. 20V17. In the course of the work, eukaryotic vectors carrying CRISPR-PpCas9 and CRISPR-DfCas9 systems were created, and the nuclease activity of PpCas9 and DfCas9 was tested in HEK293T human cells. The CRISPR-DfCas9 system did not demonstrate genome modification, while CRISPR-PpCas9 was able to introduce double-strand breaks in the genomic DNA. To improve the efficiency of the CRISPR-PpCas9 system we selected the optimal length of the spacer segment of the guide RNAs. To deliver CRISPR-PpCas9 to living organisms in the AAV form, we minimized the size of the vector carrying the system and package it in viral capsids. As a result of this work, a new tool for eukaryotic genome editing was created. It is based on the CRISPR-PpCas9 system from Pasteurella pneumotropica – a small-sized system that directionally introduces breaks in the genomic DNA of human cells.

Document access rights

Network User group Action
ILC SPbPU Local Network All Read Print Download
External organizations N2 All Read
External organizations N1 All
Internet Authorized users SPbPU Read Print Download
Internet Authorized users (not from SPbPU, N2) Read
Internet Authorized users (not from SPbPU, N1)
-> Internet Anonymous

Usage statistics

stat Access count: 6
Last 30 days: 0
Detailed usage statistics