Магистерская работа «Оценка влияния мутаций в гене GBA на эффективность транслокации фермента глюкоцереброзидазы в лизосомы на первичной культуре макрофагов до и после воздействия фармакологическими шаперонами» посвящена оценке эффективности восстановления активности и транслокации фермента глюкоцереброзидазы (GCase) в лизосомы при воздействии фармакологическими шаперонами (ФШ). В ходе работы была произведена оценка эффективности аллостерического активатора GCase N07 и предложенных нами его химических модификаций на первичной культуре макрофагов пациентов с болезнью Гоше (БГ) и лиц контрольной группы в восстановлении активности и транслокации GCase в лизосомы. В ходе работы были определены нетоксичные концентрации исследуемых соединений. Также исходя из полученных данных можно сделать вывод, что предложенные нами соединения лучше повышают транслокацию фермента GCase в лизосомы на первичной культуре макрофагов пациентов с БГ, при этом различия в эффективности так же обуславливаются наличием различных мутаций в гене GBA у пациентов с БГ. Проведены следующие эксперименты: получение мононуклеарной фракции из периферической крови, культивирование моноцитов и макрофагов, оценка выживаемости первичных культур макрофагов при воздействии аллостерическего  активатора GCase N07 и его модификаций, оценка колокализации GCase и маркера лизосом Lamp2 в первичных макрофагах пациентов с БГ и контроля методом иммуногистохимического окрашивания, оценка ферментативной активности GCase и концентрации лизосфинголипидов методом тандемной масс-спектрометрии в сухом пятне крови и макрофагов, статистическая обработка данных.

Master's thesis "Evaluation of the effect of mutations in the gba gene on the efficiency of translocation of the enzyme glucocerebrosidase into lysosomes in primary culture of macrophages before and after exposure to pharmacological chaperones" evaluation of the effectiveness of the restoration of the translocation of the glucocerebrosidase enzyme (GCase) in lysosomes when exposed to pharmacological chaperones (PC). In the course of the work, the effectiveness of the allosteric activator GCase N07 and our proposed foreign modifications for the presence of cultural macrophages in patients with Gaucher disease (GD) and the control group on restoring GCase activity and translocation in lysosomes was evaluated.In the course of the work, non-toxic concentrations of the studied compounds were determined. Also, based on the data obtained, it can be concluded that the compounds proposed by us better increase the translocation of the GCase enzyme into lysosomes on the primary culture of macrophages from patients with GD, while differences in efficiency are also due to the presence of various mutations in the GBA gene in patients with GD. The following experiments were carried out: obtaining a mononuclear surface from peripheral blood, cultivating monocytes and macrophages, assessing the survival of primary culture macrophages under the influence of macrophages of the allosteric activator GCase N07 and its modifications, colocalization of GCase and the lysosome marker Lamp2 in primary macrophages of GD patients and control by immunohistochemical staining, evaluation GCase enzymatic activity and detection of lysosphingolipids by tandem mass spectrometry in dry blood spot and macrophages, statistical data processing.

• СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
• ВВЕДЕНИЕ
• ГЛАВА 1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР
• 1.1. Болезнь Гоше
  • 1.1.1. Клиническая картина, эпидемиология и диагностика
  • 1.1.2. Фермент глюкоцереброзидаза в норме и при патологии
  • 1.1.3. Ген GBA
• 1.2. Модели дисфункции лизосомы (фермента GCase)
  • 1.2.1. In vitro и in vivo модели для изучения дисфункции лизосомы
  • 1.2.2. Макрофаги как модель дисфункции лизосомы
• 1.3. Методы лечения Болезни Гоше
  • 1.3.1. Фермент заместительная терапия
  • 1.3.2. Субстрат редуцирующая терапия
  • 1.3.3. Фармакологические шапероны
    • 1.3.3.1. Ингибирующие шапероны
    • 1.3.3.2. Аллостерические активаторы
• ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
• 2.1. Характеристика обследованных групп
• 2.2. Получение мононуклеарной фракции из периферической крови
• 2.3. Культивирование моноцитов и макрофагов
• 2.4. Метод оценки токсичности аллостерического активатора глюкоцереброзидазы N07 и его модификаций колориметрическим методом (тест MTS)
• 2.5. Культивирование первичных культур макрофагов с аллостерическим активатором глюкоцереброзидазы N07 и его модификациями
• 2.6. Метод иммуногистохимического окрашивания первичных культур макрофагов
• 2.7. Оценка оценкой ферментативной активности GCase и концентрации лизосфинголипидов методом тандемной масс-спектрометрии в исследуемых образцах
• ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
• 3.1. Подтверждение фенотипического созревания первичных культур макрофагов
• 3.2. Оценка токсичности аллостерического активатора глюкоцереброзидазы N07 и его модификаций
• 3.3. Оценка транслокации фермента GCase в первичных макрофагах пациентов с болезнью Гоше и лиц контрольной группы при воздействии фармакологическими шаперонами.
• 3.4. Оценка ферментативной активности GCase и концентрации лизосфинголипидов при воздействии ФШ N07 и его модификациями
• ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
• ЗАКЛЮЧЕНИЯ И ВЫВОДЫ
• СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ