Details

Данная работа посвящена разработке универсального метода очистки рекомбинантных аденоассоциированных вирусных векторов с помощью метода гидрофобной хроматографии, потенциально применимого к различным серотипам вирусного вектора. В рамках работы проведена оптимизация условий лизиса клеток-продуцентов и хроматографического разделения с использованием трех различных гидрофобных сорбентов. Методология исследования включала в себя разработку схемы очистки, количественную оценку содержания вирусного вектора и уровня примесей, а также анализ функциональной активности вектора в очищенном продукте. Результаты показали, что очистка вирусного вектора методом гидрофобной хроматографии сопоставима по эффективности с применением аффинной хроматографии. Описанный подход может быть применим в лабораторной практике для получения очищенного препарата рекомбинантного аденоассоциированного вирусного вектора и предварительного скрининга его различных серотипов с целью выбора подходящего препарата-кандидата для генной терапии.

The given work is devoted to the development of a universal method for purification of recombinant adeno-associated viral vectors by hydrophobic chromatography, potentially applicable to different viral vector serotypes. The work involved optimising the conditions for cell lysis of the producer cells and chromatographic separation using three different hydrophobic sorbents. The methodology of the study included development of a purification scheme, quantification of viral vector content and impurity levels, and analysis of the functional activity of the vector in the purified product. The results showed that purification of the viral vector by hydrophobic chromatography is comparable in efficiency to the use of affinity chromatography. The described approach can be applied in laboratory practice to obtain a highly purified preparation of recombinant adeno-associated viral vector and preliminary screening of its various serotypes in order to select a suitable candidate product for gene therapy.